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        基質(zhì)膠不會(huì )用?Q&A一文速覽

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        GelNest? 基質(zhì)膠

        -常見(jiàn)問(wèn)題與解析-


        實(shí)驗測試?

        細胞培養測試?


        GelNest?基質(zhì)膠是由小鼠腫瘤組織中提取的基底膜成分制備而成,包含的主要成分有層粘連蛋白、IV型膠原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。這些成分可以提供細胞黏附、分化和增殖所需的支持和信號,同時(shí)也可以模擬生理環(huán)境中基底膜的特性,提高細胞培養的成功率和效果。

        除了基底膜成分,GelNest?基質(zhì)膠中還富含多種生長(cháng)因子。這些生長(cháng)因子可以促進(jìn)細胞分化、增殖和遷移,從而進(jìn)一步模擬生理環(huán)境中的細胞信號通路和互動(dòng)。GelNest?基質(zhì)膠具有廣泛的應用前景,特別是在組織工程、細胞培養和研究等方面,可被用于類(lèi)器官培養、干細胞分化、血管生成、遷移或侵襲和體內腫瘤發(fā)生等研究。



        常見(jiàn)Q&A






        1.GelNest?高濃度基質(zhì)膠用于哪些實(shí)驗?


        GelNest?高濃度基質(zhì)膠可適用于體內應用研究,如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(cháng)。高蛋白濃度同時(shí)可使GelNest?基質(zhì)膠注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子的原位保持,便于用于原位分析和/或以后的切除。



        2.GelNest?基質(zhì)膠包裝瓶的材質(zhì)是什么?


        GelNest?基質(zhì)膠選用AccureVial?COP 瓶進(jìn)行包裝運輸。環(huán)烯烴聚合物(COP)瓶作為中硼硅玻璃的替代品,具有極高的設計靈活性,其不易破碎的特點(diǎn),也降低了物流運輸成本。

        COP瓶?jì)?yōu)勢:

        ★可耐受-196℃低溫儲存;

        ★較玻璃材質(zhì)而言不易破碎;

        ★低蛋白吸附性;

        ★可耐受PH值>10的溶液,不易產(chǎn)生脫片,對基質(zhì)膠進(jìn)行安全性保護。



        3.如何將GelNest?基質(zhì)膠用于3D培養?怎樣制作3D膠?需要將細胞嵌入到GelNest?基質(zhì)膠中嗎?


        GelNest?高濃度基質(zhì)膠可適用于體內應用研究,如制備厚層包被用于3D細胞培養。細胞可以嵌在GelNest?基質(zhì)膠中或者接種在GelNest?基質(zhì)膠表面(覆蓋法)。



        4.使用GelNest?基質(zhì)膠時(shí),移液器吸頭和離心管需要預冷嗎?


        是的。因為GelNest?基質(zhì)膠在高于10℃的條件下即會(huì )開(kāi)始成膠,我們推薦操作基質(zhì)膠時(shí)使用預冷的移液管、吸頭和離心管。



        5.GelNest?基質(zhì)膠會(huì )快速聚合嗎?


        GelNest?基質(zhì)膠在10℃至35℃時(shí)會(huì )快速聚合成膠。



        6.什么情況下,需要使用無(wú)酚紅GelNest?基質(zhì)膠?


        對于涉及顏色檢測的實(shí)驗,推薦使用無(wú)酚紅GelNest?基質(zhì)膠,如使用熒光染料或Drabkins法計數內皮細胞成管實(shí)驗。對于子宮內膜細胞培養,也需使用無(wú)酚紅GelNest?基質(zhì)膠。

        此外,酚紅和非甾體雌激素結構類(lèi)似,有類(lèi)雌激素效應。在實(shí)驗動(dòng)物體內可能具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。



        7.如何從GelNest?基質(zhì)膠中收獲細胞?


        推薦使用中性蛋白酶或細胞回收解決方案來(lái)收獲培養在GelNest?基質(zhì)膠中的細胞。中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液,不會(huì )損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續接種培養或進(jìn)行檢測的細胞,使用中性蛋白酶不會(huì )產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。

        對于代謝研究和RNA抽提,建議在4℃使用細胞回收解決方案進(jìn)行非酶反應的細胞收集。因為GelNest?基質(zhì)膠中含有痕量的RNA,進(jìn)行RNA分析時(shí),應設一個(gè)GelNest?基質(zhì)膠(不接種細胞)的對照組。

        其它從GelNest?基質(zhì)膠中收獲細胞的方法:降低溫度至4℃-6℃使GelNest?基質(zhì)膠解聚,需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應用。



        8.GelNest?基質(zhì)膠包被過(guò)的培養皿可以?xún)Υ娑嚅L(cháng)時(shí)間呢?


        包被過(guò)的培養皿最好當天使用,具體情況取決于實(shí)驗目的。

        需要保存的情況下,可在37°C培養箱中最多存放7天。保存時(shí)GelNest?基質(zhì)膠表面需要使用無(wú)血清培養基均勻覆蓋,保持濕潤。



        9.哪些情況下應該選用薄膠?什么時(shí)候用厚膠呢?3D培養有哪些應用?


        薄膠主要用于輔助細胞貼壁,有利于細胞增殖。如原代細胞培養,需要一層薄薄的蛋白層輔助,就可以選用薄膠。

        厚膠主要用于3D細胞培養,如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細血管樣結構(RingAssay),以及進(jìn)行細胞侵襲實(shí)驗等。3D細胞培養實(shí)驗,主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構,如生物組織等。



        10.進(jìn)行內皮管形成實(shí)驗,應該選用多大濃度的GelNest?基質(zhì)膠呢?


        進(jìn)行該實(shí)驗,GelNest?基質(zhì)膠最低濃度應不低于10mg/mL。



        11.GelNest?基質(zhì)膠的最低成膠濃度是多少?


        不同的實(shí)驗目的需要不同的GelNest?基質(zhì)膠濃度,用戶(hù)應該根據具體的實(shí)驗需求確定。

        GelNest?基質(zhì)膠最低成膠濃度為7mg/mL。稀釋時(shí)不要簡(jiǎn)單進(jìn)行體積倍比稀釋?zhuān)煌伍g的GelNest?基質(zhì)膠濃度有差異,應該根據最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體(如PBS或無(wú)血清培養基)的量。

        用于體內研究的GelNest?基質(zhì)膠,為了避免成膠不完全,最終工作濃度不應低于10mg/mL。



        12.GelNest?基質(zhì)膠膠塊在體內可以維持多長(cháng)時(shí)間?


        基質(zhì)膠膠塊可以在體內維持至少一周的時(shí)間。



        13.怎樣稀釋GelNest?基質(zhì)膠?


        使用冰上預冷的無(wú)血清培養基或者PH=7.4的PBS。



        14.應該如何對GelNest?基質(zhì)膠移液操作?


        推薦使用預冷的移液器或者注射器操作,移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時(shí)不要觸及瓶子底部;分液時(shí)切忌過(guò)快、用力過(guò)猛。

        如果使用移液管(Pipets),需要分液5mL時(shí),應該吸取6mL,分液到移液管內仍有1mL時(shí)即停止;如果使用自動(dòng)移液器(Pipetman),按壓到第二檔位吸液,然后按壓到第一檔位進(jìn)行分液。



        15.為什么我的GelNest?基質(zhì)膠很粘稠?


        基質(zhì)膠的蛋白濃度越高,膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL,基質(zhì)膠會(huì )顯得非常厚重。

        GelNest?基質(zhì)膠產(chǎn)品在未稀釋前都會(huì )比較粘稠。粘稠的高濃度GelNest?基質(zhì)膠不稀釋也可以直接使用,如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子,注射于小鼠體內后,細胞可以保持原位,便于原位分析和/或以后的切除;或者稀釋后,按照標準濃度的GelNest?基質(zhì)膠產(chǎn)品使用方法使用,具體稀釋濃度根據實(shí)驗需求確定。

        除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外,基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過(guò)程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個(gè)運輸過(guò)程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏GelNest?基質(zhì)膠的冰箱帶有自動(dòng)除霜功能,冰箱除霜過(guò)程中升溫,可能使基質(zhì)膠成膠。所以,切忌將GelNest?基質(zhì)膠儲藏于此類(lèi)冰箱中。

        為保證GelNest?基質(zhì)膠的使用效果,凍融次數應該盡可能減少。拿到新的GelNest?基質(zhì)膠后,請按照單次用量進(jìn)行分裝。每次融化操作,GelNest?基質(zhì)膠都應該放置于冰上。



        16.為什么GelNest?基質(zhì)膠在37°C成膠,而在4°C時(shí)卻呈液體狀態(tài)?


        GelNest?基質(zhì)膠是一種從小鼠腫瘤中提取的重組基底膜,新鮮提取的原料中主要包括以下成分:層粘連蛋白,IV型膠原,巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生長(cháng)因子、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子及其他生長(cháng)因子。

        這些蛋白構成了GelNest?基質(zhì)膠的基本結構。在22℃-37℃溫度條件下,大分子間的共價(jià)鍵可以結合,促使GelNest?基質(zhì)膠形成凝膠。而在低溫條件(如4℃)下,由于沒(méi)有足夠的能量促使共價(jià)鍵結合,所以GelNest?基質(zhì)膠呈現液體狀態(tài)。



        17.GelNest?基質(zhì)膠可以反復凍融嗎?


        建議用戶(hù)第一次融化后按照單次用量進(jìn)行分裝,保存。



        18.為什么細胞沒(méi)有貼壁?GelNest?基質(zhì)膠也脫落了?


        首先需要檢查細胞的接種濃度是否過(guò)高,GelNest?基質(zhì)膠的用量應等同于細胞培養體系中培養基的用量。如果GelNest?基質(zhì)膠被稀釋到過(guò)低的濃度,形成的膠體容易從組織培養器皿表面分離。



        19.未稀釋的GelNest?基質(zhì)膠中出現的沉淀應該怎么樣處理?


        4℃下低速離心,去除沉淀物。



        20.未使用完的GelNest?基質(zhì)膠應該怎樣保存的?


        與細胞培養基或緩沖液混合過(guò)但未使用完的GelNest?基質(zhì)膠,不建議保留再用。



        21.GelNest?基質(zhì)膠可以?xún)Υ嬖?70℃嗎?


        是的。GelNest?基質(zhì)膠可以?xún)Υ嬖?70℃。建議客戶(hù)將整瓶的GelNest?基質(zhì)膠進(jìn)行分裝,儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質(zhì)的小管中,方便保存和使用。



        22.GelNest?基質(zhì)膠會(huì )有自發(fā)熒光嗎?


        GelNest?基質(zhì)膠是一種蛋白混合物,所以GelNest?基質(zhì)膠可能引發(fā)熒光的組分為蛋白質(zhì)成分。如果需要使用熒光檢測細胞生長(cháng)狀態(tài),建議使用者建立對照實(shí)驗,在所需要的波長(cháng)條件下進(jìn)行對比,以便排除背景熒光。



        23.使用GelNest?基質(zhì)膠培養的細胞,如果需要進(jìn)行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒光檢驗,該怎樣固定呢?如何避免解聚?


        可以使用2%濃度的多聚甲醛進(jìn)行固定。為避免固定后出現解聚的情況,可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定劑,常用于電鏡觀(guān)察。

        如果用戶(hù)需要進(jìn)行免疫熒光檢驗,加入戊二醛后,會(huì )出現明顯的背景熒光。為了解決這一問(wèn)題,我們建議用戶(hù)在固定之后,使用NaBH4進(jìn)行淬滅。NaBH4極易產(chǎn)生氣泡,進(jìn)行該步驟時(shí),必須在水平操作臺上小心操作,避免晃動(dòng),盡量減少氣泡的形成。另外,用戶(hù)也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進(jìn)行固定,如0.1%到0.5%,濃度越低,背景熒光信號越少。



        24.為什么GelNest?的顏色不一樣?


        因為二氧化碳和碳酸氫鹽緩沖液及酚紅的反應,冷凍或剛融解的GelNest?都有可能呈現不同顏色,顏色從稻草黃到暗紅色不等。

        酚紅在冷凍或者酸性環(huán)境下呈現明黃色,在接近生理pH值或0oC以上呈現紅色。

        GelNest?出現顏色上的區別是正常情況,不會(huì )影響產(chǎn)品質(zhì)量,并且在和5%的二氧化碳平衡后,會(huì )恢復到統一顏色。






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